豬藍(lán)耳病毒俗稱豬繁殖與呼吸綜合征(Porcine reproductive and respiratory syndrome, PRRS)

    豬藍(lán)耳病毒 是由豬繁殖與呼吸綜合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)引起的一種以感染豬發(fā)熱、厭食,妊娠母豬晚期流產(chǎn)、早產(chǎn)、產(chǎn)死胎、弱胎和木乃伊胎,各種年齡豬(特別是仔豬)呼吸障礙為特征的高度傳染性疾病

    PRRSV屬于尼多病毒目(Nidovirales)動脈炎病毒科動脈炎病毒屬的成員，根據(jù)病毒的抗原性，基因組及致病性的差異，PRRSV可分為2個型,即歐洲型（LV株為代表株）和美洲型（ATCC-VR2332株為代表株），兩種毒株間氨基酸的同源性為78%～81%

豬藍(lán)耳病毒 來源：

    該病于1987年更加早發(fā)現(xiàn)于美國。1991年荷蘭人Wensvoot等首次從發(fā)病仔豬和母豬體內(nèi)分離到了該病毒,當(dāng)時稱為Lelystad病毒。隨后德國、美國、英國等國家和地區(qū)也分離到了該病毒。目前,該病已遍及北美洲及歐洲,在全球范圍內(nèi)傳播。郭寶清等(1996)首次從國內(nèi)疑似PRRS感染豬群中分離出PRRSV,從而證實(shí)了本病在我國的存在。該病傳播速度快,尤其在技術(shù)進(jìn)步和經(jīng)濟(jì)發(fā)達(dá)國家,由于豬群密集、流動頻繁,更易引起流行。在一個嚴(yán)重流行期過后,此病常為地方流行性,長期危害養(yǎng)豬生產(chǎn),給養(yǎng)豬業(yè)造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失

豬藍(lán)耳病毒 研究成果綜述

    研究表明 PRRSV感染后，豬體免疫系統(tǒng)參與了病毒導(dǎo)致的疾病發(fā)生和感染后的免疫保護(hù)作用。PRRSV感染后易引起T細(xì)胞亞群和肺泡巨噬細(xì)胞在數(shù)量與功能上的變化；急性期感染能夠促進(jìn)一些細(xì)菌和呼吸道病毒的繼發(fā)感染；同時，E蛋白能夠誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，PRRSV感染后N蛋白和M蛋白能夠較早誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生抗體，但無中和作用;E蛋白產(chǎn)生的中和抗體有不定期的保護(hù)作用。另外，PRRSV感染后也能引起特異性細(xì)胞免疫反應(yīng)?？偨Y(jié)近年來的研究，現(xiàn)將PRRS的免疫學(xué)更加新研究成果綜述如下。

1、抗體依賴性增強(qiáng)作用

    PRRSV一個重要免疫學(xué)特征是抗體依賴性增強(qiáng)作用(antibody dependent enhancement, ADE)。有資料報(bào)道，在肺泡的巨噬細(xì)胞培養(yǎng)物中，加入一定滴度的PRRSV抗體，可使PRRSV產(chǎn)量明顯增加，甚至?xí)岣?0倍～100倍。在某些情況下，免疫產(chǎn)生的抗體不但不能提供保護(hù)作用，反而有助于病毒的復(fù)制。病毒中加入PRRSV抗體可使病毒在胎兒體內(nèi)的復(fù)制比單獨(dú)注射病毒顯著增強(qiáng)，剛斷乳仔豬呼吸道疾病的臨床癥狀比其他較大年齡的豬嚴(yán)重,說明ADE在PRRS發(fā)病機(jī)制及免疫病理學(xué)中起重要作用，但目前對PRRS的發(fā)病機(jī)理仍不清楚,盡管有許多假設(shè)（包括免疫抑制）,但都缺乏足夠令人信服的證據(jù)。PRRSV在體內(nèi)外都表現(xiàn)ADE，妊娠后期的胎兒已出現(xiàn)主動免疫應(yīng)答,但此時形成的抗體對跨胎盤感染的PRRSV的ADE效應(yīng),可能是母豬妊娠后期流產(chǎn)的主要原因之一。仔豬對PRRSV易感性高歸咎于亞中和水平母源抗體的存在, 這些都提示PRRS致病機(jī)制可能涉及ADE。另外，ADE可能是由GP5糖蛋白誘導(dǎo)的。

2、T淋巴細(xì)胞與免疫相關(guān)細(xì)胞

    淋巴細(xì)胞肩負(fù)著細(xì)胞免疫功能，其中包括Th細(xì)胞的輔助功能，Tc細(xì)胞的直接殺傷功能，釋放細(xì)胞因子誘導(dǎo)激活周圍細(xì)胞和組織發(fā)揮免疫效應(yīng)的遲發(fā)性超敏反應(yīng)及免疫調(diào)節(jié)功能?，F(xiàn)已發(fā)現(xiàn)豬感染PRRSV后,外周血淋巴細(xì)胞中T細(xì)胞亞群有異常變化,PRRSV自然感染豬CD2+ 和CD8+細(xì)胞數(shù)增多,CD4+細(xì)胞數(shù)量及CD4/CD8比例下降,研究還發(fā)現(xiàn),感染和未感染豬的胸腺細(xì)胞亞群沒有差異,這說明PRRSV不調(diào)節(jié)胸腺內(nèi)T細(xì)胞的變化。豬感染PRRSV以后，肺泡巨噬細(xì)胞是該病毒的首選靶細(xì)胞，占被感染細(xì)胞的80%～94%，而使肺泡巨噬細(xì)胞的比例明顯降低。Rossow等發(fā)現(xiàn)攻擊PRRSV之后,淋巴組織(如脾動脈周圍的淋巴鞘，扁桃體，腸系膜淋巴結(jié)，胸腺皮質(zhì))中的淋巴細(xì)胞減少,外周血中白細(xì)胞數(shù)降低,這些變化都會導(dǎo)致感染豬易繼發(fā)感染。李華等［12］研究表明，外周血CD3+、CD4+、CD8+和SLADR+表達(dá)細(xì)胞在感染早期比例下降；感染豬扁桃體的CD3+、CD4+和CD8+細(xì)胞亞群比例下降；腸系膜淋巴結(jié)的CD3+細(xì)胞亞群在感染后下降,但是SLADR+細(xì)胞亞群有逐漸升高的趨勢。因此，仔豬感染PRRSV后淋巴細(xì)胞各亞群的比例下降可能會抑制機(jī)體對其它病原體的免疫反應(yīng),扁桃體的細(xì)胞比例變化有利于其他呼吸道病原體的混合感染或繼發(fā)感染。

3、細(xì)胞因子

    病毒感染巨噬細(xì)胞和單核細(xì)胞以及隨后造成的細(xì)胞死亡，可導(dǎo)致很多單核細(xì)胞因子包括IL-1、IL-6和IL-8的釋放。IL-1是免疫應(yīng)答和炎癥反應(yīng)的基本要素和致熱原，IL-6參與B細(xì)胞的更加終成熟和免疫球蛋白的更加終合成，IL-8則是T細(xì)胞的趨化因子。所釋放的其他單核因子還包括TNF-α，INF-α，INF-β。據(jù)報(bào)道，PRRSV感染早期IFN-γ表達(dá)顯著增加，而對IFN-γ表達(dá)有增強(qiáng)作用的IL-12 p40的表達(dá)卻呈下降趨勢。IFN-γ是Th1類細(xì)胞因子的典型代表，并且是促進(jìn)細(xì)胞免疫應(yīng)答的效應(yīng)因子，可抑制在巨噬細(xì)胞中的復(fù)制，其作用機(jī)制是能阻斷病毒蛋白的正常合成，還能增強(qiáng)巨噬細(xì)胞產(chǎn)生超氧陰離子的能力。IL-4很難檢測到，它是Th2類細(xì)胞因子的主要代表，主要促進(jìn)機(jī)體的體液免疫，推測PRRSV感染后的IL-4表達(dá)受到抑制。IL-10的表達(dá)水平有輕微的降低，其主要起平衡兩類細(xì)胞因子并促進(jìn)細(xì)胞極化的作用，推測PRRSV感染后體液免疫受到一定的抑制。

4、體液免疫

    豬接觸PRRSV后,產(chǎn)生一系列的抗PRRSV 的特異性抗體,首次感染后有助于避免再次感染,但體液免疫在免疫保護(hù)作用中的機(jī)制尚不完全清楚。接種PRRSV后7 d開始出現(xiàn)抗囊膜蛋白E的抗體,2周后即可檢出抗衣殼蛋白N的抗體和基質(zhì)蛋白M的抗體,多克隆血清在感染早期可強(qiáng)烈吸附N蛋白和M蛋白，4周~5周后才出現(xiàn)特異性中和抗體，在出現(xiàn)中和抗體后,多克隆抗血清主要識別E蛋白,這提示E蛋白在感染的晚期可能誘導(dǎo)產(chǎn)生中和抗體。這與E蛋白的A、B兩個抗原位點(diǎn)有關(guān)，位點(diǎn)A為非中和位點(diǎn)具有很強(qiáng)的免疫優(yōu)勢，充當(dāng)誘騙因子的角色；位點(diǎn)B為中和位點(diǎn)，高度保守不具有免疫優(yōu)勢,這或許是病毒在進(jìn)化過程中所形成的一種自我保護(hù)能力，這也可能是PRRSV持續(xù)感染及長期病毒血癥的原因之一?？筆RRSV的IgM抗體在病毒接種后的5 d~7 d將會出現(xiàn)，在2周～3周后將檢測不到其存在；抗PRRSV的IgG在病毒接種后的7 d~10 d首先被檢測到，在2周~4周后達(dá)到頂峰，將會持續(xù)數(shù)月，到300 d左右降低到低水平；抗PRRSV的IgA將在病毒接種14 d后才在血清中被檢測到，在25 d到達(dá)更加大值，35 d后則不能被檢測到。豬在感染PRRSV后6周~7周才能觀察到病毒血癥的出現(xiàn)，更加初的反應(yīng)卻不是產(chǎn)生干擾素及相關(guān)的細(xì)胞因子。

盡管抗PRRSV的抗體水平很高，但中和抗體出現(xiàn)較慢，在臨床上，PRRSV總是表現(xiàn)為長期的持續(xù)性感染，說明體液免疫的保護(hù)作用并不完全。并且由于ADE的存在，抗PRRSV的抗體通過Fc受體結(jié)合在巨噬細(xì)胞上，形成免疫復(fù)合物，提高了Fc受體陽性細(xì)胞的病毒感染作用，所以，亞中和水平的體液抗體還對PRRSV感染具有促進(jìn)作用。

Molitor T W報(bào)道,非免疫母豬所產(chǎn)仔豬被動獲得PRRSV抗體不能對攻毒產(chǎn)生保護(hù)，而免疫母豬所產(chǎn)仔豬則可被保護(hù)；Yoon K  J等證明在被動獲得抗體的豬體內(nèi)，PRRSV感染和復(fù)制反而得到增強(qiáng)。說明單獨(dú)用抗體也許不能保護(hù)豬不發(fā)病,細(xì)胞免疫可能保護(hù)豬不受PRRSV感染。

5、細(xì)胞免疫

    有資料表明，細(xì)胞介導(dǎo)的免疫反應(yīng)（CMI）可能在PRRSV感染中起到很重要的作用。 據(jù)報(bào)道,PRRSV感染后28 d出現(xiàn)抗原特異性的淋巴細(xì)胞增生,在第49天達(dá)到高峰,第77天時出現(xiàn)下降,重復(fù)感染后細(xì)胞增生反應(yīng)的幅度加大。這種增生性反應(yīng)可被抗CD4+及MHCⅡ類抗原的抗體所阻斷,表明這種增生性反應(yīng)是CD4+及T淋巴細(xì)胞依賴性的。PRRSV感染可產(chǎn)生Th1細(xì)胞介導(dǎo)的免疫反應(yīng),其感染程度也受CD8+反應(yīng)的影響。在自然感染PRRSV的豬體內(nèi)，淋巴細(xì)胞亞群發(fā)生了變化,外周血中CD4+/CD8+細(xì)胞的比例明顯降低。由于PRRSV常常與繼發(fā)感染有密切的關(guān)系,因此,PRRSV并非總是誘導(dǎo)產(chǎn)生這樣的變化,而由于毒株的來源及毒力的差異, 所以不同報(bào)道結(jié)果也不盡一致,有的甚至產(chǎn)生相反的結(jié)果。Bruin M G M等通過淋巴細(xì)胞增生試驗(yàn)和病毒特異性干擾素產(chǎn)生的細(xì)胞試驗(yàn)，對PRRSV野毒接種豬、偽狂犬(PRV)疫苗接種豬，以及與PRRSV疫苗接種豬的細(xì)胞免疫反應(yīng)進(jìn)行比較，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，PRRSV野毒接種豬可產(chǎn)生長期而強(qiáng)烈的細(xì)胞免疫反應(yīng)，與PRV疫苗接種豬的細(xì)胞免疫反應(yīng)相當(dāng)。而PRRSV減毒活疫苗接種豬的細(xì)胞免疫反應(yīng)與保護(hù)性極好的PRV疫苗誘導(dǎo)的細(xì)胞免疫反應(yīng)效果相差甚遠(yuǎn)。

6、免疫抑制

    PRRSV主要侵害豬體的巨噬細(xì)胞系統(tǒng)，特別是肺泡巨噬細(xì)胞，使感染豬的免疫力降低，引發(fā)免疫抑制,造成多系統(tǒng)多器官疾病,如病毒血癥、間質(zhì)性肺炎、血管炎、淋巴結(jié)病、心肌炎和腦炎等，肺泡巨噬細(xì)胞的比例明顯降低，肺泡巨噬細(xì)胞中的炎性細(xì)胞因子(IL-1和腫瘤壞死因子)的活性增強(qiáng),細(xì)胞的非特異性殺菌活性受到抑制,并伴有循環(huán)淋巴結(jié)細(xì)胞的破壞及黏膜纖毛系統(tǒng)清除系統(tǒng)的破壞，對其他疾病的易感性也增強(qiáng)，也可惡化慢性傳染性疾?。?9］。感染的肺泡巨噬細(xì)胞或外周血單核細(xì)胞表面的抗原表達(dá)調(diào)節(jié)能力下降或喪失,使在循環(huán)抗體存在的情況下,通過細(xì)胞免疫監(jiān)視系統(tǒng)不易將病毒從感染豬中清除而導(dǎo)致長期的病毒血癥和持續(xù)感染。Galina等證實(shí)，PRRSV可加劇豬鏈球菌(Streptococcus suis，SS)感染。Reeth V發(fā)現(xiàn)PRRSV會加重呼吸道冠狀病毒(Porcine respiratory corona virus，PRCV)和豬流感病毒(Swine influenga virus，SIV)引發(fā)的病情,但對后者的復(fù)制無明顯影響。Rovira等通過感染試驗(yàn)發(fā)現(xiàn),PRRSV可促進(jìn)豬圓環(huán)病毒2型(Porcine circo virus type 2，PCV-2)在豬體內(nèi)的增殖,使豬病理變化明顯加重。在PRRSV感染豬中,經(jīng)常分離出豬胸膜肺炎放線桿菌(Actinobacillus pleuropneumoniae，APP)、豬肺炎支原體(Mycoplasma hyopneumoniae，Mhp)、化膿性放線菌(CA)、副豬嗜血桿菌(Haemophilu parasuis，HPS)等［2］。但也有許多研究證明，PRRSV引起的免疫抑制是暫時性的，僅在肺中并局限于一定的水平。大量試驗(yàn)表明,事先接種PRRSV對隨后的HPS、多殺性巴氏桿菌(Pmc)、APP、Mhp等病原沒有激化作用,并不加劇它們的致病變程度。這些證據(jù)顯示,PRRSV對免疫系統(tǒng)的影響也許不是嚴(yán)重而持久的。由PRRSV引發(fā)的豬的呼吸道病常伴發(fā)細(xì)菌感染是PRRSV感染的一大特征,由PRRSV引起的免疫損傷和在合并癥中各種病原微生物的關(guān)系在試驗(yàn)中沒有得到復(fù)制，不同PRRSV毒株在誘發(fā)機(jī)體產(chǎn)生免疫抑制方面的差別也沒有得到比較。所以在沒有實(shí)驗(yàn)室證據(jù)前，應(yīng)慎重看待PRRSV在誘發(fā)豬體產(chǎn)生免疫抑制方面的作用。

7、免疫調(diào)節(jié)

    研究表明，感染豬對布魯氏菌，大腸埃希菌菌毛抗原及滅活的偽狂犬病病毒體液免疫應(yīng)答增強(qiáng)。遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)（DTH）檢測表明，感染豬對二硝基氟苯(DNFB)的細(xì)胞免疫應(yīng)答也增強(qiáng)。因此，認(rèn)為PRRSV感染可引起全身性免疫抑制并無根據(jù),相反卻可使多克隆的T和B細(xì)胞激活，促進(jìn)機(jī)體免疫的調(diào)節(jié)。但關(guān)于機(jī)體免疫調(diào)節(jié)的作用仍需開展大量研究工作。

8、免疫病理學(xué)

    PRRS病豬外周血液中淋巴細(xì)胞數(shù)量明顯減少,大多數(shù)淋巴細(xì)胞變性、壞死，表現(xiàn)出淋巴細(xì)胞腫脹、破碎，很難見到正常淋巴細(xì)胞；病豬淋巴細(xì)胞平均占白細(xì)胞的32.9%，而健康豬為40.3%。

幾乎所有的病豬的淋巴結(jié)都發(fā)生了嚴(yán)重的壞死性變化。病理變化主要表現(xiàn)在肺和淋巴結(jié)，因?yàn)镻RRSV主要是在單核巨噬細(xì)胞系統(tǒng)內(nèi)進(jìn)行復(fù)制的,PRRSV侵害免疫器官是因?yàn)榱馨徒Y(jié)和脾含有豐富的血管及大量的游離或固定的巨噬細(xì)胞［。當(dāng)病毒隨血流進(jìn)入淋巴結(jié)和脾臟后，除引起廣泛性血管炎和炎性細(xì)胞聚集外，病毒還隨滲出物進(jìn)入組織各部位并被巨噬細(xì)胞吞噬，同時病毒在其內(nèi)復(fù)制，結(jié)果造成壞死性炎癥的特征性變化；在淋巴結(jié)這種損傷幾乎是全身性的,脾的這種變化也是普遍存在的,只是程度不同而已。由于淋巴結(jié)、淋巴小結(jié)和副皮質(zhì)區(qū)及脾臟的白髓和紅髓都受到了廣泛性的破壞,致使機(jī)體的體液免疫和細(xì)胞免疫能力降低。豬肺血管內(nèi)巨噬細(xì)胞在清除血液內(nèi)的細(xì)菌和其他有害粒子方面具有十分重要的作用。豬血管內(nèi)巨噬細(xì)胞對PRRSV極為敏感,表現(xiàn)為直接導(dǎo)致受感染的巨噬細(xì)胞對血液中異常顆粒物質(zhì)的清除能力降低,同時對肺泡洗液檢查,證實(shí)巨噬細(xì)胞數(shù)量明顯減少,正常豬肺泡洗液巨噬細(xì)胞占所見細(xì)胞的95%,PRRSV感染豬則為50%；Done用PRRS美洲株VR2332感染豬后,觀察到感染豬肺部淋巴細(xì)胞暫時減少,對循環(huán)血液細(xì)胞有破壞作用。結(jié)果表明,肺泡巨噬細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞及其它部位的單核巨噬細(xì)胞系統(tǒng)的細(xì)胞都受到了普遍性的損傷，表現(xiàn)為腫脹、壞死、脫落和發(fā)生廣泛性的溶細(xì)胞作用；各級支氣管黏膜上皮細(xì)胞腫脹、壞死、脫落，從而使支氣管、細(xì)支氣管的清除機(jī)能嚴(yán)重破壞。血液涂片檢查發(fā)現(xiàn)，病豬外周血中的淋巴細(xì)胞減少，且多發(fā)生變性或壞死；電鏡觀察發(fā)現(xiàn)，淋巴結(jié)和脾淋巴細(xì)胞的線粒體、粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)都受到了損傷,使其合成和分泌抗體的能力降低,從而不能有效地抵御各種有害物質(zhì)的侵襲。

    PRRS的以上免疫學(xué)特點(diǎn)決定了其在免疫防控過程中的種種難題，另外，機(jī)體免疫應(yīng)答機(jī)制研究仍不深入，更使當(dāng)前對該病的防控研究沒有可靠的理論依據(jù)。因此，進(jìn)一步進(jìn)行PRRS免疫機(jī)制的研究，開發(fā)出安全有效的新型疫苗，為疫苗免疫預(yù)防打下堅(jiān)實(shí)的基礎(chǔ)尤為重要。同時，在免疫應(yīng)答機(jī)制研究的基礎(chǔ)上，進(jìn)行疫苗免疫佐劑的研究和開發(fā)，也是今后需要做的重要工作之一。

    動物疫病快速診斷儀 廣泛適用于動物疫病檢測、畜禽養(yǎng)殖、水產(chǎn)養(yǎng)殖、水產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)部門等可進(jìn)行動物疫病快速診斷，包括2008年《中華人民共和國動物防疫法》《一、二、三類動物疫病病種名錄》規(guī)定管理的動物疫病，一類 動物疫病（17種）、二類 動物疫病（77種、三類 動物疫?。?3種）如豬藍(lán)耳病毒、豬瘟病毒、豬偽狂犬病毒、豬偽狂犬病毒gE蛋白、豬圓環(huán)病毒、豬乙型腦炎病毒、豬口蹄疫3ABC蛋白、豬口蹄疫病毒IgG、豬細(xì)小病毒、雞禽流感、藍(lán)舌病、白斑綜合征、牛傳染性胸膜肺炎、牛瘟、綿羊痘和山羊痘等定量快速檢測，并且可以和疫病診斷分析系統(tǒng)聯(lián)網(wǎng)工作 

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